氨基修饰磁珠
氨基修饰磁珠是一种在医学与分子生物学研究中广泛应用的载体工具。它们是由超顺磁性材料和高分子材料组成的新型功能化磁性微球,具有粒径小、表面积大、偶联容量高、悬浮稳定性好等特点。这些磁珠的表面在包被上有活性基团,能够与多种生物活性物质发生偶联,兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点。在一定条件下,氨基磁珠可以通过交联试剂(如戊二醛等)的介导,与蛋白配体(如抗原、抗体等)、寡核苷酸探针等生物分子共价偶联,这类偶联有生物配体的氨基磁珠即为免疫磁珠。
制备方法
氨基修饰磁珠的制备方法有两种,一种是先合成硅包磁性纳米粒子后氨基化修饰,另一种是一壶法直接合成氨基化硅包磁性纳米粒子。通过这两种方法,可以得到表面带有丰富氨基基团的磁性纳米粒子,这些粒子既可以用作非特异性的吸附生物检测物的基因组DNA,又可以作为特异性的分离目标检测物的特定核酸序列的载体。
应用领域
氨基修饰磁珠在多个领域都有广泛的应用,包括但不限于蛋白质的分离提纯、细胞分离、酶的固定、免疫分析等。它们可以便捷高效地与多种生物配体(蛋白、多肽、寡聚核苷酸、药物分子等)进行高载量结合,作为良好的基础材料进行包被、吸附、化学改性等后续处理。
注意事项
磁珠的取用和保存:使用前应充分混匀磁珠,防止取用改变磁珠浓度,并避免长时间超声对磁珠表面破坏。磁珠使用和保存过程中应避免冻融。
偶联反应的条件:偶联溶液的离子强度对提高偶联效率很重要,一般来说,偶联溶液的离子强度越低越好。偶联溶液不应含任何氨基(如Tris)或羧基(如乙酸酯和柠檬酸),但洗涤缓冲液或保存液可以含氨基或羧基。
蛋白浓度的优化:反应的蛋白浓度需要优化,蛋白浓度太低会导致磁珠交联。对于昂贵的蛋白,如果蛋白浓度太低,可以加入别的蛋白(如BSA)占据剩余的反应活性位点。
安全操作:含戊二醛或吡啶的溶液具有挥发性和毒性,应在化学通风橱里进行相应操作。磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作,这些操作会降低磁珠结合能力。
氨基修饰磁珠
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