镍磁珠

简要描述:镍磁珠是一种广泛应用于生物技术领域的磁性微球,主要用于蛋白质的纯化。这类磁珠通常由镍离子(Ni2+)饱和的硅基磁珠制成,具有结合容量和稳定性,特别适用于异源蛋白纯化。

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  • 更新时间:2024-05-15
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镍磁珠

镍磁珠 

镍磁珠是一种广泛应用于生物技术领域的磁性微球,主要用于蛋白质的纯化。这类磁珠通常由镍离子(Ni2+)饱和的硅基磁珠制成,具有结合容量和稳定性,特别适用于异源蛋白纯化。

镍磁珠的特点和优势

结合容量:镍磁珠相比于钴磁珠展现出高的蛋白结合容量,特别是在处理高表达的异源蛋白时,其优势更为明显。

 

易于自动化操作:镍磁珠的使用可以实现不同体积浓度目标蛋白的一步高通量纯化,且易于自动化操作。

 

可重复使用:镍磁珠可以反复使用,再生工艺简单,这大大降低了纯化成本和环境污染的风险。

 

稳定性:镍磁珠可以在变性条件下使用,例如在6MGuanadine8MUrea的存在下,其结构稳定,不易受到竞争性小分子的影响。

 

适用范围广:镍磁珠适用于多种细胞类型和环境下的组氨酸标签蛋白纯化,包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和动物细胞表达的组氨酸标签蛋白。

 镍磁珠

镍磁珠的应用流程

使用镍磁珠进行蛋白质纯化的一般流程如下:

样品处理:首先,需要对细胞或细胞提取物进行破碎和裂解,以释放目标蛋白。然后,将粗蛋白样品与预处理的镍磁珠进行结合。


 磁珠预处理:镍磁珠需要先进行预处理,包括充分混匀和磁性分离,以确保其表面均匀地吸附目标蛋白。

 

目标蛋白与磁珠结合:将粗蛋白样品加入装有预处理镍磁珠的离心管中,轻轻翻转离心管数次,使磁珠悬浮,并在旋转混合仪上室温旋转混合一段时间。然后,将离心管置于磁性分离器上进行磁性分离,移出上清液至新的离心管中。

 

磁珠洗涤:通过连续洗涤步骤,使用不同的缓冲液去除非特异性结合的蛋白质和其他杂质。洗涤过程通常包括加入洗涤缓冲液到装有磁珠的离心管中,轻轻翻转离心管数次,使磁珠重新悬浮,然后进行磁性分离。

 

目标蛋白洗脱:最后,通过逐步增加洗脱缓冲液中的咪唑浓度,逐渐释放结合在镍磁珠上的目标蛋白。当目标蛋白全部洗脱时,收集洗脱液到新的离心管中,即得到纯化的目标蛋白样品。

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