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JC-1(线粒体膜电位探针)的描述

2024-05-26 [100]

检测原理

JC-1的工作原理基于其在不同线粒体膜电位状态下的荧光特性变化。在高线粒体膜电位的情况下,JC-1以聚合物的形式存在,发出红色荧光;而在低线粒体膜电位的情况下,JC-1以单体的形式存在,发出绿色荧光。通过监测红绿荧光的比例变化,可以评估线粒体的状态,从而判断细胞的健康程度或是否处于凋亡过程中。

结构式:

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概述

JC-1是一种常用的荧光探针,用于测量线粒体膜电位。它能够选择性地进入线粒体,并且随着线粒体膜电位的增加,可以逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质使得JC-1成为研究细胞凋亡时的理想工具,因为线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。

染色步骤

使用JC-1进行线粒体膜电位检测的步骤通常包括细胞准备、 JC-1染色、洗涤和荧光检测等几个环节。具体的步骤可能会根据实验条件和设备的不同而有所差异,但基本流程通常是:

细胞准备:将细胞铺板在多孔培养板上,然后在适宜的条件下培养过夜。

JC-1染色:取一定体积的细胞悬液,加入 JC-1工作液,在适宜的温度和二氧化碳环境下孵育一段时间。

洗涤:离心细胞悬液,去除上清,然后用缓冲液洗涤以去除未结合的染料。

荧光检测:用荧光显微镜或流式细胞仪分析经JC-1染色后的细胞,通过观察红绿荧光的比例变化来判断线粒体膜电位的状态。

注意事项

JC-1必须在超纯水充分溶解混匀后才能加入到JC-1染色缓冲液中,否则会影响后续的检测。

PH的变化会影响膜电位,因此在染色过程中需要保持染液中pH的一致性。

JC-1不易溶于水并有大量沉淀产生,因此在操作时需要特别注意。

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