蛋白A磁珠的介绍


蛋白A磁珠是一种基于蛋白A与免疫球蛋白Fc段特异性结合原理设计的磁性微粒,广泛应用于抗体纯化、免疫沉淀(IP)、共免疫沉淀(Co-IP)等生物化学和分子生物学研究领域。以下是对蛋白A磁珠的详细介绍:
一、基本原理
蛋白A磁珠的核心成分是重组蛋白A,它能够特异性地结合多数哺乳动物IgG的Fc端(如小鼠、人、兔、猪、犬和猫等)。每个蛋白A分子可结合多个IgG分子(通常为5个),从而实现对抗体的高效捕获和纯化。磁珠本身具有超顺磁性,在外磁场作用下可快速分离,撤去磁场后易于分散,便于实验操作。
二、物理特性
粒径:通常为纳米级(如200nm)或微米级(如1μm),具体取决于产品设计和应用需求。
比表面积:纳米级磁珠具有超大比表面积,便于快速结合抗体或抗体复合物。
磁响应性:超顺磁性设计确保磁珠在外磁场作用下快速分离,且撤去磁场后无剩磁,易于分散。
三、核心优势
高容量:结合容量高,每次实验的样品用量更少。
低非特异性结合:稳定的预封闭磁珠设计可减少非特异性吸附,提供高纯度的产物。例如,在免疫沉淀实验中,洗脱的抗原中不含来自复杂细胞裂解物的污染性蛋白。
高效分离:磁珠可消除树脂损耗,与仅使用离心管的传统IP方法相比,分离效率更高。
兼容性:兼容手动和自动化操作(如Thermo Scientific KingFisher仪器),适用于高通量工作流程。
四、主要应用
抗体纯化:从血清、细胞培养物上清液或腹水中纯化抗体。
免疫沉淀(IP):捕获细胞或组织提取物中的抗原-抗体复合物。
共免疫沉淀(Co-IP):研究蛋白质相互作用网络。
其他应用:如抗原表位分析、蛋白质复合物纯化等。
五、注意事项
避免离心:离心可能导致磁珠聚集,降低结合能力。
避免干燥:磁珠干燥可能导致不可逆的损伤,影响实验结果。
储存条件:通常建议在2-8℃下储存,避免冷冻。
单次使用:多数蛋白A磁珠设计为单次使用,重复使用可能影响实验结果。
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