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链霉亲和素修饰PBS微球,PBS Particles-Streptavidin的介绍

2025-09-22 [116]

链霉亲和素修饰PBS微球(通常指聚苯乙烯微球)是一种结合了链霉亲和素高亲和性与聚苯乙烯微球物理稳定性的功能化材料,广泛应用于生物检测、免疫分析、分子诊断及细胞分选等领域。

一、核心特性

  1. 高亲和力结合
    链霉亲和素(Streptavidin)与生物素(Biotin)的结合力较强(Kd≈10⁻¹⁵ M),且不受pH、温度等因素干扰。这种特性使修饰后的微球能特异性捕获生物素标记的分子(如抗体、核酸、蛋白质),实现高灵敏度检测。

  2. 物理稳定性
    聚苯乙烯(PS)微球具有良好的机械强度、化学稳定性和生物相容性,表面光滑且均一性高,粒径可控(通常100 nm–10 µm),满足不同实验需求。

  3. 表面功能化
    微球表面可修饰羧基(-COOH)、氨基(-NH₂)等官能团,通过化学交联(如EDC/NHS活化)将链霉亲和素稳定偶联于微球表面,保持其四聚体结构与生物素结合能力。

  4. 多功能衍生化
    除链霉亲和素外,微球表面还可共修饰荧光染料、磁性颗粒或亲水分子,用于改善分散性、降低非特异吸附或增强信号读出能力。

二、制备方法

  1. 微球合成
    通过乳液聚合或悬浮聚合制备聚苯乙烯微球,控制粒径和表面特性(如羧基化处理)。

  2. 表面活化
    使用EDC/NHS等试剂活化微球表面羧基,形成活性酯中间体,为链霉亲和素偶联提供反应位点。

  3. 链霉亲和素偶联
    将高纯度链霉亲和素溶液与活化微球混合,室温反应2小时,通过共价键固定于微球表面。

  4. 封闭与纯化
    加入BSA或甘氨酸封闭未结合位点,减少非特异性吸附;通过离心或透析去除游离链霉亲和素,保存于4°C PBS缓冲液中。

三、应用领域

  1. 免疫分析

    • ELISA改进:将链霉亲和素修饰微球与生物素标记抗体结合,用于检测抗原,显著提高灵敏度。

    • 侧向层析技术(LFA):作为标记物,实现快速诊断(如病原体检测)。

  2. 分子诊断

    • 核酸分析:结合生物素化探针,实现PCR产物捕获、基因序列检测,适用于病原体检测和基因突变分析。

    • 微阵列芯片:作为探针固定载体,用于高通量基因表达分析。

  3. 细胞分选与成像

    • 流式细胞术:通过荧光信号和链霉亲和素-生物素特异性结合,实现高精度细胞分选(如CD19+ CAR-T细胞分选纯度>90%)。

    • 荧光显微成像:标记细胞表面抗原,观察细胞形态、结构及分子分布。

  4. 生物分离与纯化

    • 亲和层析:将链霉亲和素固定于基质上,与生物素标记的目标分子结合,实现特异性分离。

    • 磁分离:结合磁性颗粒,通过磁场快速分离目标分子,提高分离效率。

关于我们:

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温馨提示:仅用于科研,不能用于人体!

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