Biotin sulfo-N-hydroxysuccinimide ester 是一种水溶性生物素化试剂，全称 Sulfosuccinimidyl biotin（磺基琥珀酰亚胺基生物素），简称 Sulfo-NHS-Biotin，核心功能是通过酰胺键高效标记含游离氨基（-NH₂）的生物分子，广泛用于蛋白质、抗体、多肽的生物素化修饰。
结构特点分子由三部分组成：
生物素端：与链霉亲和素 / 亲和素具有超高亲和力（Kd≈10⁻¹⁵ M），用于后续靶标分子的捕获、分离或检测。
间隔臂：短碳链连接生物素与活性酯，降低空间位阻，保障偶联效率。
磺基 - NHS 酯端：磺酸盐基团（-SO₃⁻） 赋予分子优异水溶性，无需有机溶剂助溶；NHS 酯基团可与伯氨基（如蛋白质赖氨酸残基的 ε-NH₂）在温和条件下反应，生成稳定酰胺键，同时释放 N - 羟基琥珀酰亚胺（NHS）。
反应条件
缓冲体系：优选 PBS（pH 7.0-8.5） 或碳酸氢钠缓冲液（pH 8.0-8.5），避免使用含氨基的缓冲液（如 Tris、甘氨酸），防止竞争反应。
反应温度：室温或 4℃，反应时间 30 min-2 h，具体取决于靶标分子浓度。
终止反应：加入过量甘氨酸（终浓度 50 mM）或 Tris 缓冲液，孵育 10-15 min 淬灭未反应的 NHS 酯基团。
水溶性优异：磺基修饰解决了传统 NHS-Biotin（CAS 35013-72-0）水溶性差的问题，可直接溶于水相反应体系，避免使用 DMF、DMSO 等有机溶剂对生物分子活性的破坏。
反应特异性高：仅与游离伯氨基高效偶联，不与巯基、羧基等其他基团反应，标记位点可控。
生物相容性好：标记后不影响靶标分子的生物活性，适用于活体、细胞及体外实验体系。
防潮处理：NHS 酯基团对水敏感，易水解失效，试剂需在干燥环境下取用，开封后尽快使用。
pH 控制：反应体系 pH 需严格控制在 7.0-8.5，pH 过低会降低 NHS 酯活性，pH 过高会加速 NHS 酯非特异性水解。
纯化步骤：反应后需通过透析、凝胶过滤层析（如 Sephadex G-25）去除游离生物素和副产物，避免干扰后续实验。
投料比：根据靶标分子的氨基数量调整试剂与底物的摩尔比（通常 1:5-1:20），过高投料比易导致过度标记，影响分子活性。
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