褪黑素生物素化探针|生物素-褪黑素Biotin-Mel的核心特性

一、褪黑素母核与可修饰位点选择

褪黑素的药效团包含吲哚母核、5 位甲氧基、3 位乙胺基乙酰酰胺侧链。SAR 构效研究表明：5 - 甲氧基与吲哚环、酰胺侧链是 MT₁/MT₂受体结合的核心区域，不可随意修饰，改造后极易丧失受体结合亲和力。

可修饰位点：

1. 吲哚环 N1 位：吲哚环上的 NH，远离受体结合口袋，对褪黑素与 MT₁/MT₂相互作用干扰最小，是文献常用的衍生位点；在此引入带保护氨基的 linker。

2. 备选：吲哚苯环远端位点修饰，风险更高，容易降低受体亲和力，合成后必须做受体结合活性验证。

Linker 选型

• C6 烷基 linker：柔性好、合成简单；缺点是探针整体疏水性强，水相体系易析出。

• PEG2/PEG3 亲水 linker：改善探针水溶性，适合细胞裂解液 Pull-down 实验，优先推荐。

二、Biotin-Melatonin 合成路线逻辑

1. 在褪黑素吲哚 N1 位点选择性衍生，接入带有 Boc 保护氨基的连接臂；

2. 酸性条件脱 Boc 保护，暴露游离伯胺；

3. 无水 DMF/DMSO 体系，TEA 作为弱碱，与 Biotin-NHS 发生酰胺化反应；

4. 制备 HPLC 纯化产物，LC-MS 确认目标分子量；

5. 活性验证：做 MT₁/MT₂受体结合实验，验证探针保留受体结合能力。

三、Biotin-Melatonin 核心科研应用

1. Pull-down 靶点垂钓（最核心用途）将 Biotin-Melatonin 探针与细胞裂解液共孵育；加入链霉亲和素磁珠捕获探针及其结合蛋白；洗脱后使用 WB 或 LC-MS 质谱鉴定蛋白。除验证 MT₁、MT₂受体，还可挖掘褪黑素胞内结合蛋白、下游信号互作分子，解析褪黑素多通路作用机制。

2. 竞争结合实验加入过量游离褪黑素作为竞争剂，观察目标蛋白条带减弱或消失，验证结合特异性，测定 KD、IC50，区分特异性结合与磁珠非特异吸附。

3. SPR 表面等离子共振 / 亲和色谱将探针固定在芯片，定量研究褪黑素与 MT₁/MT₂受体的分子相互作用、亲和力差异，用于受体亚型选择性评估。

4. 进阶光交联探针改造可在 linker 中插入二苯甲酮光交联基团，构建光亲和生物素探针，捕获活细胞内瞬时、弱相互作用的蛋白。

生物素-肌苷，Biotin-Inosine

生物素-亚油酰胺，Biotin-Linoleamide

阿魏酸-生物素

生物素-人血清白蛋白

生物素-OVA

生物素-血红蛋白

生物素-胶原蛋白

生物素-转铁蛋白

生物素-异亮氨酸

生物素-瓜氨酸

生物素-丹酚酸B

生物素-油酸

生物素-棕榈油酸

维生素B-Biotin

Biotin-维甲酸

生物素-石胆酸

生物素-谷氨酸

生物素-熊去氧胆酸

生物素-二十二碳六烯酸

生物素-传明酸

生物素-苯丙氨酸

羟氯喹-生物素