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介绍一下甘氨鹅去氧胆酸-鸡卵清白蛋白偶联物的制备方法

2024-10-11 [77]

甘氨鹅去氧胆酸-鸡卵清白蛋白偶联物|Glycochenodeoxycholic Acid-Ovalbumin Conjugate(GCDCA-OVA)

以下是一种可能的甘氨鹅去氧胆酸 - 鸡卵清白蛋白偶联物的制备方法:

一、材料准备

甘氨鹅去氧胆酸(Glycochenodeoxycholic acidGCDCA)。

鸡卵清白蛋白(OvalbuminOVA)。

偶联试剂,如碳二亚胺类(如 1 - 乙基 -(3 - 二甲基氨基丙基) 碳二亚胺盐酸盐,EDC)、N - 羟基琥珀酰亚胺(NHS)等。

缓冲液,如磷酸盐缓冲液(PBS)等。

透析袋或超滤装置。

 

二、具体步骤

活化甘氨鹅去氧胆酸

将甘氨鹅去氧胆酸溶解在适当的缓冲液中,如 PBS

加入一定量的偶联试剂 EDC NHS,在一定温度下(如室温)搅拌反应一段时间,使甘氨鹅去氧胆酸的羧基活化。

 

偶联反应

将鸡卵清白蛋白也溶解在适当的缓冲液中,并调整到合适的浓度。

将活化后的甘氨鹅去氧胆酸溶液缓慢加入到鸡卵清白蛋白溶液中,在一定温度下(如室温或 37℃)搅拌反应数小时。

 

纯化

反应结束后,可以使用透析袋或超滤装置对反应混合物进行纯化,去除未反应的甘氨鹅去氧胆酸、偶联试剂以及其他杂质。透析可以使用合适的缓冲液,在低温下(如 4℃)进行,定期更换透析液,以确保充分去除杂质。

 

鉴定

对制备得到的甘氨鹅去氧胆酸 - 鸡卵清白蛋白偶联物进行鉴定。可以采用多种方法,如紫外 - 可见光谱分析,观察偶联物的吸收光谱变化;SDS-PAGE 电泳,分析蛋白质的分子量变化;以及免疫分析等方法,确定偶联是否成功以及偶联效率。

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