FITC-呋塞米的制备方法是什么？

呋塞米的合成

1. 氯磺化：将氯磺*和 2,4 - 二氯苯甲酸在 100-155℃温度下反应 2-6h，然后将反应物加入水中进行水解，水解液过滤，滤饼用水洗至中性，得到 2,4 - 二氯 - 5 - 磺酰氯苯甲酸。

2. 胺化：将 2,4 - 二氯 5 - 磺酰氯苯甲酸加入氨水中，在 0-50℃下反应 2-4h，中和，过滤，得到 2,4 - 二氯 - 5 - 磺酰胺基苯甲酸粗品，再将其加入乙醇水溶液中，在 40-80℃保温 0.5-2h，降温重结晶，干燥，提纯得到 2,4 - 二氯 - 5 - 磺酰胺基苯甲酸。

3. 缩合：将 2 - 呋喃甲胺和 2,4 - 二氯 - 5 - 磺酰胺基苯甲酸在 80-150℃下反应 5-12h，将反应物加入到氢氧化钠水溶液中，再用有机溶剂洗涤，中和，析出结晶，得呋塞米粗品。

4. 脱色：将呋塞米粗品加入碳酸氢钠饱和溶液中，升温至 70-100℃，再加入活性炭脱色，然后中和，结晶，离心，即得呋塞米产品。

FITC 与呋塞米的偶联

1. 溶解：分别将 FITC 和呋塞米溶解在合适的溶剂中，如二甲基亚砜（DMSO）或 N,N - 二甲基甲酰胺（DMF）等有机溶剂，制成一定浓度的溶液。

2. 反应：在适当的反应条件下，将 FITC 溶液缓慢滴加到呋塞米溶液中，同时不断搅拌，通常需要在碱性条件下进行反应，可加入适量的碱，如三乙胺等，以促进反应的进行。反应温度一般控制在室温或较低温度下，反应时间可能需要数小时甚至更长，具体取决于反应的规模和效率。

3. 纯化：反应结束后，需要对产物进行纯化，以去除未反应的 FITC、呋塞米以及其他杂质。常用的纯化方法包括柱层析、凝胶过滤、透析等，通过这些方法可以得到较纯的 FITC - 呋塞米产物。

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