1.物理混合法
步骤：
溶解 DOPE：将 DOPE 溶解在合适的有机溶剂中，常用的有机溶剂有氯仿或二氯甲烷。例如，在通风良好的通风橱中，将适量的 DOPE（如 10 - 100mg）加入到装有 1 - 10mL 氯仿的玻璃容器中，使用磁力搅拌器搅拌，直至 DOPE 全溶解，得到澄清的 DOPE 溶液。
溶解 ICG：同时，将 ICG 溶解在适当的溶剂中。由于 ICG 在水中溶解度较低，通常选择二甲基亚砜（DMSO）或 N,N - 二甲基甲酰胺（DMF）作为溶剂。例如，将一定量的 ICG（如 1 - 10mg）加入到 0.1 - 1mL 的 DMSO 中，超声处理数分钟，使其全溶解，形成 ICG 溶液。
混合溶液：在温和搅拌的条件下，将 ICG 溶液缓慢滴加到 DOPE 溶液中。滴加过程要缓慢，以确保 ICG 能够均匀地分散在 DOPE 溶液中。例如，使用滴管逐滴加入 ICG 溶液，同时保持搅拌速度在 100 - 500rpm 左右。
去除溶剂：将混合溶液转移到旋转蒸发仪中，在适当的温度（如 30 - 50℃）和真空条件下旋转蒸发，去除有机溶剂。随着溶剂的蒸发，DOPE 和 ICG 会逐渐聚集形成复合物。当溶剂基本去除后，可得到含有 DOPE - ICG 复合物的固体或半固体物质。
水化复合物：为了得到适合生物应用的 DOPE - ICG 制剂，需要对上述固体或半固体物质进行水化。加入适量的缓冲液（如磷酸盐缓冲液，pH 7.2 - 7.4），缓冲液的体积可根据所需复合物的浓度来确定，一般为 1 - 10mL。然后通过超声处理或温和搅拌，使 DOPE - ICG 复合物均匀地分散在缓冲液中，形成稳定的胶体溶液。
2.化学偶联法
3.步骤：
修饰反应物（如果需要）：首先检查 DOPE 和 ICG 的化学结构，确定合适的反应基团。如果反应基团需要活化或修饰，要提前进行相应的化学处理。例如，对于含有羧基的 ICG，可以通过与 NHS 反应生成活性酯，使其更容易与氨基反应。
溶解反应物：将 DOPE 和 ICG 分别溶解在合适的反应溶剂中。常用的反应溶剂为缓冲液，如 MES 缓冲液（pH 5.5 - 6.5）或磷酸盐缓冲液（pH 7.0 - 7.4），以提供合适的反应环境。例如，将 DOPE 和 ICG 分别溶解在不同的缓冲液中，浓度可根据反应的化学计量比来确定，一般为 0.1 - 10mM。
添加偶联试剂：在搅拌的条件下，向反应体系中依次加入偶联试剂 EDC 和 NHS。EDC 和 NHS 的用量要根据 ICG 和 DOPE 上反应基团的摩尔数来确定，一般 EDC 过量 1.2 - 1.5 倍，NHS 过量 1 - 1.2 倍。例如，若 ICG 的羧基摩尔数为 1mmol，可加入 1.2 - 1.5mmol 的 EDC 和 1 - 1.2mmol 的 NHS。
进行反应：将反应体系在适当的温度（如室温或 4 - 10℃）下反应数小时至过夜。反应过程中可以通过薄层色谱（TLC）或高效液相色谱（HPLC）来监测反应进程。例如，对于反应较慢的体系，可以在室温下反应 24 - 48 小时，期间每隔一段时间取样进行 TLC 或 HPLC 分析，观察反应物和产物的变化。
产物纯化：反应结束后，需要对产物进行纯化，以去除未反应的反应物、偶联试剂和副产物。常用的纯化方法有柱层析、透析和超滤等。例如，采用柱层析法，选择合适的固定相（如硅胶柱）和流动相（如不同比例的有机溶剂和缓冲液混合液），根据产物和杂质的极性差异进行分离，得到纯净的 DOPE - ICG 偶联物。
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2025-01-16
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