1.生物分子标记与检测应用
蛋白质标记与分析
蛋白质组学研究:在蛋白质组学中,NHS - LC - Biotin 是一种出色的标记试剂。它可以用于标记复杂生物样品中的蛋白质,例如细胞裂解液中的蛋白质。由于长链(LC)结构减少了空间位阻,使得它能够更有效地与蛋白质上的氨基(如赖氨酸残基的氨基)反应,从而将生物素标记到蛋白质上。之后通过亲和素或链霉亲和素亲和层析,可以富集和分离生物素标记的蛋白质,这对于发现新的蛋白质标志物或者研究蛋白质的功能非常有帮助。
免疫检测:在免疫分析方法中,如酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫印迹(Western blotting),NHS - LC - Biotin 可以用于标记抗体。通过将抗体与 NHS - LC - Biotin 反应,使抗体生物素化。在 ELISA 中,生物素化的抗体与抗原结合后,再与亲和素 - 酶(如辣根过氧化物酶)复合物结合,通过酶催化底物显色反应来检测抗原。这种长链结构有助于抗体在与抗原结合时保持更好的灵活性,提高检测的灵敏度和特异性。
核酸标记与检测
核酸杂交技术:在核酸杂交实验,如 Southern 杂交和 Northern 杂交中,NHS - LC - Biotin 可用于标记核酸探针。在合成寡核苷酸时,在合适的位置引入氨基,然后与 NHS - LC - Biotin 反应,将生物素标记到核酸上。生物素标记的核酸探针与目标核酸杂交后,通过与荧光标记的亲和素或链霉亲和素结合,可以方便地检测出目标核酸的位置和数量,用于基因定位和基因表达分析等。长链结构在核酸杂交过程中可以减少空间位阻,使标记的核酸更好地与目标序列结合。
基因芯片技术:在基因芯片实验中,也可以用 NHS - LC - Biotin 标记 cDNA 或 RNA 样本。标记后的样本与芯片上的寡核苷酸阵列杂交,然后用荧光标记的亲和素检测杂交信号,这样可以高通量地分析基因的表达情况。长链间隔臂有助于核酸在芯片表面更好地与阵列杂交,提高信号的准确性和可靠性。
2.生物分子相互作用研究应用
蛋白质 - 蛋白质相互作用研究
用于构建双标记系统来研究蛋白质 - 蛋白质相互作用。例如,将一种蛋白质用 NHS - LC - Biotin 标记生物素,另一种蛋白质用其他标记(如荧光标记)。当两种蛋白质相互作用时,通过生物素与亲和素或链霉亲和素的结合,结合荧光检测技术,可以观察到荧光信号的变化,从而研究蛋白质 - 蛋白质相互作用的动力学和结合位点等信息。长链结构可以减少标记过程中的空间位阻,并且在相互作用研究中,使生物素标记的蛋白质能够更好地与其他标记的蛋白质接触和相互作用。
在研究蛋白质复合物的结构和功能时,NHS - LC - Biotin 可以标记复合物中的一个或多个蛋白质成分。通过亲和素或链霉亲和素介导的分离技术,将标记的蛋白质复合物从细胞提取物中分离出来,然后利用其他结构生物学技术(如 X - 射线晶体学、冷冻电镜等)对其进行分析,有助于深入了解蛋白质之间的协同作用机制。长链间隔臂有助于在不破坏蛋白质复合物结构的前提下进行标记。
蛋白质 - 核酸相互作用研究
在研究转录因子与 DNA 的相互作用时,NHS - LC - Biotin 可用于标记转录因子。标记后的转录因子与 DNA 结合,然后通过与亲和素或链霉亲和素结合的检测系统(如亲和素 - 荧光素),可以研究转录因子与 DNA 的结合亲和力、结合位点和结合模式等。长链间隔臂可以使转录因子在与 DNA 结合时,生物素部分更容易被检测系统识别,同时减少标记对转录因子与 DNA 结合的干扰。
对于 RNA - 蛋白质相互作用,同样可以采用类似的策略。例如,在研究核糖体蛋白与核糖体 RNA 的相互作用时,用 NHS - LC - Biotin 标记核糖体蛋白,结合亲和素 - 磁性珠分离技术和 RNA 测序技术,可以详细了解 RNA - 蛋白质相互作用在翻译过程中的作用机制。长链结构有助于在复杂的核糖体环境中更好地标记核糖体蛋白。
3.生物材料与药物研发应用
药物研发与靶向治疗应用
药物递送系统构建:在药物递送系统中,NHS - LC - Biotin 可用于标记药物载体(如脂质体、聚合物纳米颗粒)。如果载体上含有氨基,它就可以与 NHS - LC - Biotin 反应,将生物素标记到载体上。这些生物素标记的载体可以利用生物素与细胞表面受体的相互作用,实现药物的靶向递送。长链间隔臂可以帮助载体更好地与受体结合,并且在药物释放过程中可能起到一定的调节作用,提高药物治疗的效果。
药物筛选与评价平台构建:在药物筛选平台中,NHS - LC - Biotin 可以用于标记药物靶点蛋白。将标记后的靶点蛋白固定在芯片或微孔板表面,然后与小分子药物库中的化合物进行相互作用测试。通过检测生物素与亲和素或链霉亲和素结合信号的变化来筛选出与靶点蛋白有高亲和力的药物候选物。长链间隔臂可以使靶点蛋白在固定后保持更好的活性状态,更真实地反映其与药物的相互作用,提高药物筛选的准确性和效率。
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