氨丙啉-过氧化物酶标记物的制备方法有哪些

氨丙啉-过氧化物酶标记物的制备方法主要有以下几种：

戊二醛二步法

• 原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-抗体结合物。

• 步骤：

• 取一定量的过氧化物酶（如辣根过氧化物酶，HRP），用0.1M的PBS（pH6.8）溶解，配制成一定浓度的酶溶液。

• 向酶溶液中加入适量的戊二醛，使其终浓度为0.05% - 0.1%，室温下搅拌反应1 - 2小时。

• 反应结束后，用PBS透析或超滤除去未反应的戊二醛。

• 取一定量的氨丙啉，用0.1M的PBS（pH7.2）溶解，配制成一定浓度的氨丙啉溶液。

• 将上述处理后的酶溶液与氨丙啉溶液混合，室温下搅拌反应2 - 4小时。

• 反应结束后，用PBS透析或超滤除去未反应的氨丙啉，得到氨丙啉-过氧化物酶标记物。

过碘酸钠法

• 原理：过碘酸钠可将HRP分子表面的糖链氧化，形成醛基，再与氨丙啉上的氨基结合，形成标记物。

• 步骤：

• 取一定量的HRP，用0.1M的PBS（pH6.8）溶解，配制成一定浓度的酶溶液。

• 向酶溶液中加入适量的过碘酸钠，使其终浓度为0.05% - 0.1%，室温下搅拌反应30 - 60分钟。

• 反应结束后，用PBS透析或超滤除去未反应的过碘酸钠。

• 取一定量的氨丙啉，用0.1M的PBS（pH7.2）溶解，配制成一定浓度的氨丙啉溶液。

• 将上述处理后的酶溶液与氨丙啉溶液混合，室温下搅拌反应2 - 4小时。

• 反应结束后，用PBS透析或超滤除去未反应的氨丙啉，得到氨丙啉-过氧化物酶标记物。

碳二亚胺法

• 原理：碳二亚胺可活化HRP分子上的羧基，使其与氨丙啉上的氨基形成酰胺键，从而实现标记。

• 步骤：

• 取一定量的HRP，用0.1M的PBS（pH6.8）溶解，配制成一定浓度的酶溶液。

• 向酶溶液中加入适量的碳二亚胺（如EDC），使其终浓度为0.05% - 0.1%，室温下搅拌反应1 - 2小时。

• 反应结束后，用PBS透析或超滤除去未反应的碳二亚胺。

• 取一定量的氨丙啉，用0.1M的PBS（pH7.2）溶解，配制成一定浓度的氨丙啉溶液。

• 将上述处理后的酶溶液与氨丙啉溶液混合，室温下搅拌反应2 - 4小时。

• 反应结束后，用PBS透析或超滤除去未反应的氨丙啉，得到氨丙啉-过氧化物酶标记物。

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