FITC-Lyso-PAFC-16制备方法有哪些

FITC-Lyso-PAFC-16（绿色荧光素修饰溶血磷脂）的制备方法主要基于荧光素（如异硫氰酸荧光素，FITC）与溶血磷脂酰胆碱（Lyso-PAF C-16）之间的化学偶联反应，以下是具体的制备思路及要点：

1. 反应物准备：

• 准备纯化的Lyso-PAF C-16溶液，通常使用适当的缓冲液（如pH 9.5的碳酸盐缓冲液）进行稀释，以确保反应在适宜的pH条件下进行。

• 称取适量的FITC，用相同的缓冲液溶解，形成FITC溶液。FITC的用量需根据与Lyso-PAF C-16的摩尔比来确定，通常这个比例在1:20到1:100之间。

2. 偶联反应：

• 将Lyso-PAF C-16溶液置于电磁搅拌器上，启动搅拌，注意搅拌速度要适中，以避免产生泡沫。

• 逐滴加入FITC溶液到Lyso-PAF C-16溶液中，这个过程大约需要10到15分钟。加完后，随时用试纸测定搅拌液的pH值，若低于9.0，则应以碳酸钠溶液调整。

• 将反应混合物置于4°C下搅拌6到12小时，以确保偶联反应充分进行。

3. 反应后处理：

• 反应完成后，可能需要通过透析、凝胶过滤或其他纯化方法来去除未反应的FITC和其他杂质。

• 透析法是将标记好的产物放入透析袋中，于适当的缓冲液（如0.01 Mol/L pH7.6 PBS或生理盐水）中4°C透析数天，每天换液数次，直至透析液中无游离色素为止。

• 凝胶过滤法则使用葡聚糖凝胶柱进行过滤，可以更快地去除游离的FITC。

4. 产品保存：

• 纯化后的FITC-Lyso-PAFC-16应储存在适当的条件下，通常是在-20°C或更低的温度下，并保持干燥和避光，以避免荧光素的淬灭和产物的降解。

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