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二氧化钛磁珠的用途有哪些呢

2025-11-05 [8]

二氧化钛磁珠(1μm)是一种专有的磁性材料微粒载体,其核心用途集中在磷酸化肽富集外泌体分离两大领域,具体应用场景及优势如下:

一、磷酸化肽富集:蛋白质组学研究的关键工具

  1. 作用机制
    二氧化钛(TiO₂)对磷酸丝氨酸(pSer)、磷酸苏氨酸(pThr)和磷酸酪氨酸(pTyr)残基具有选择性亲和力,能高效富集复杂生物样品(如细胞裂解液、组织提取物)中的磷酸化肽。其表面纳米粒子对单磷酸化肽和多磷酸化肽无偏好,适合单步富集用于质谱分析。

  2. 操作优势

    • 高特异性:与磷酸化肽的亲和力远高于非磷酸化肽,减少背景干扰。

    • 高重复性:磁珠表面结构均一,确保实验结果一致性。

    • 快速磁响应:磁响应时间<30秒,减少样品损失,适配自动化操作。

    • 化学兼容性:厚壳层磁珠耐受强酸、强碱,适用于化学环境。

  3. 典型流程

    • 平衡磁珠:用上样缓冲液(如1M羟基乙酸、80%乙腈、5%三氟yi酸,pH 2.5-3.0)洗涤磁珠。

    • 结合目标肽:将消化后的蛋白样品与磁珠混合,室温孵育20-30分钟。

    • 洗涤去除非特异性结合:用洗涤缓冲液(如80%乙腈、1%三氟yi酸)清洗磁珠。

    • 洗脱与收集:用洗脱缓冲液(如1%氢氧化铵)洗脱磷酸化肽,酸化后进行质谱分析。

  4. 应用案例

    • 基础研究:从细胞裂解液中富集磷酸化肽,揭示磷酸化修饰位点及动态变化。

    • 临床研究:分析疾病样本中的磷酸化蛋白标志物。

二、外泌体分离:疾病诊断与生物标志物发现的新方法

  1. 作用机制
    TiO₂磁珠通过与外泌体磷脂双分子层的磷酸基形成双齿结构,特异性捕获外泌体;磁性内核支持快速分离,碱性溶液洗脱后可回收完整外泌体。

  2. 操作优势

    • 高回收率:从100mL血浆中提取约10⁸个外泌体,回收率达80%。

    • 高纯度:白蛋白等污染物含量显著低于超速离心法。

    • 快速分离:整个过程<20分钟,远快于传统超速离心法(8-10小时)。

    • 结构完整性:洗脱的外泌体可直接用于下游分析(如透射电镜、蛋白质印记)。

  3. 典型流程

    • 结合外泌体:将血浆样本与磁珠混合,室温孵育使磁珠捕获外泌体。

    • 磁分离:用磁分离器去除未结合成分,保留磁珠-外泌体复合物。

    • 洗脱与收集:用碱性溶液洗脱外泌体,中和后进行下游分析。


三、其他潜在应用

  • 糖肽富集:TiO₂对糖基化残基的亲和力使其可用于糖肽选择性富集。

  • 核酸提取:部分磁珠通过表面修饰实现核酸高通量、自动化提取。

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温馨提示:仅用于科研,不能用于人体!

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