磁珠法提取全血gDNA的流程是怎样的呢

磁珠法提取全血gDNA的流程主要分为裂解、结合、洗涤、洗脱四个核心步骤，具体操作及原理如下：

一、裂解

• 操作：取200μL全血样品，加入200μL裂解液（含GuHCl/SDS）和10μL蛋白酶K，充分混匀后于55°C水浴10分钟。

• 原理：裂解液中的GuHCl和SDS能够破坏细胞膜和核膜，使gDNA从细胞中释放出来。同时，加入RNA酶A（10μg/mL）可去除RNA干扰，确保提取的gDNA纯度。

二、结合

• 操作：加入300μL结合缓冲液和20μL磁珠（使用前颠倒或吹吸混匀），颠倒混匀10分钟。将离心管置于磁力架上1分钟，使磁珠被吸附，移走管内液体。

• 原理：调节pH至5.0-6.5（羧基磁珠最佳结合条件），创造高盐环境，屏蔽DNA磷酸基团的负电荷，促进其与磁珠表面官能团（如羧基、氨基等）的结合。磁珠表面修饰的官能团通过静电作用或共价键与DNA的磷酸骨架结合，实现特异性吸附。

三、洗涤

• 操作：加入500μL洗涤缓冲液Ⅰ，颠倒混匀数次后利用磁力架吸附磁珠，1分钟后移走管内液体。重复上述步骤，依次使用洗涤缓冲液Ⅱ和洗涤缓冲液Ⅲ进行洗涤。

• 原理：使用70%乙醇等洗涤液去除盐分和杂质（如蛋白质、多糖等）。通过多次洗涤，确保磁珠表面清洁，提高gDNA的纯度。

四、洗脱

• 操作：加入50-100μL洗脱缓冲液（如TE缓冲液，pH 8.0），使磁珠重新悬浮，55°C水浴10分钟，其间轻轻晃动使DNA充分洗脱。将离心管置于磁力架1分钟，使磁珠被吸附，将液体转移至新的离心管中，得到纯化的DNA产物。

• 原理：使用低盐缓冲液（如TE缓冲液）改变环境，破坏静电和氢键作用，使DNA从磁珠上解吸附下来。通过加热和轻轻晃动，促进DNA的洗脱效率。

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