NHS修饰96孔板的制备方法有哪些
2026-01-02
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NHS修饰96孔板的制备方法主要包括以下步骤,这些步骤基于共价结合原理,通过NHS与碳二亚胺(如EDC)联用,活化孔板表面的羧基,进而与目标分子中的氨基发生反应,形成稳定的酰胺键:
一、准备阶段
孔板选择:选择通常为聚苯乙烯或聚丙烯材质的96孔板。
表面羧基化:若孔板表面无羧基,需通过等离子体处理、化学氧化或硅烷化等方法引入羧基。
清洗孔板:用去离子水或PBS缓冲液冲洗孔板,去除表面杂质。
二、活化阶段
配制EDC/NHS溶液:将EDC(如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)和NHS按一定比例(如1:1)溶解在缓冲液(如MES,pH 4.5-6.0)中。
加入孔板:每孔加入适量EDC/NHS溶液,室温孵育15-30分钟,使羧基充分活化。
清洗孔板:弃去活化液,用缓冲液冲洗孔板,以去除未反应的EDC和NHS。
三、固定阶段
加入目标分子溶液:加入含目标分子(如抗体、蛋白质)的溶液,室温孵育1-2小时或4℃过夜,使NHS酯与氨基反应形成酰胺键。
清洗孔板:弃去固定液,用缓冲液冲洗孔板,以去除未结合的目标分子。
四、封闭阶段
加入封闭剂:加入封闭剂(如5% BSA或脱脂奶粉),室温孵育1-2小时,封闭未反应的羧基,减少非特异性吸附。
清洗孔板:弃去封闭液,用缓冲液冲洗孔板,干燥后密封保存(通常4℃可保存数月)。
五、使用前预处理
使用前需根据实验需求进行预处理,如洗涤、孵育等。
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