Biotin-bisamido-SS-NHS Ester有哪些用途呢

Biotin-bisamido-SS-NHS Ester（CAS: 142439-92-7）是一种双生物素可裂解型氨基反应性标记试剂，核心优势在于双生物素高亲和力 + 双硫键可断裂 + NHS酯高效偶联三合一设计。以下是其主要用途：

一、蛋白质标记与高灵敏度检测

通过NHS酯与蛋白质、抗体或酶上的伯氨基（-NH₂）形成稳定酰胺键，将双生物素标签连接到目标分子上。双生物素设计使其与链霉亲和素的结合力显著增强（一个链霉亲和素可同时结合两个生物素），标记灵敏度和检测信号大幅提高，特别适合Western blot、ELISA、免疫荧光、流式细胞术等需要高灵敏度检测的场景。标记后加入还原剂（DTT、BME或TCEP）即可断裂双硫键，温和释放天然活性蛋白。

二、Pull-down与靶点鉴定

先通过NHS酯将双生物素标签连接到含炔基标记的小分子药物或蛋白质上，再用链霉亲和素磁珠富集。双点结合使捕获更牢固，非特异性吸附更低。还原洗脱后获得天然活性蛋白，可直接用于质谱鉴定和药物靶点发现。相比普通单生物素试剂，双生物素设计大幅提升了捕获效率和检测灵敏度。

三、可逆亲和纯化与低丰度蛋白富集

在蛋白质组学研究中，该试剂标记蛋白质后通过链霉亲和素系统富集，再用还原剂温和洗脱回收。整个过程无需SDS、尿素等强变性剂，目标蛋白活性完整保留，特别适合酶蛋白、治疗性抗体等对活性要求较高的分子的纯化，也适合复杂样品中低丰度蛋白的分离与质谱鉴定。

四、PROTAC合成（PROTAC Linker）

Biotin-bisamido-SS-NHS Ester 被明确归类为PROTAC Linker，可用于PROTAC分子的模块化构建。双生物素端提供强结合力，双硫键提供可裂解性，NHS酯提供偶联活性，是合成蛋白降解靶向嵌合体（PROTAC）的理想连接子单元。

五、可控释放药物递送

利用双硫键的还原响应性，将药物分子偶联到该试剂上，再通过生物素-亲和素系统定向递送至靶细胞。进入肿瘤细胞后，胞内高浓度谷胱甘肽（GSH，2-10 mM）自动断裂双硫键，药物在靶向位置选择性释放，提高治疗选择性并降低全身毒性。该策略可与纳米载体、脂质体、聚合物微球或水凝胶结合，开发智能控释平台。

六、细胞内蛋白标记与追踪

与Sulfo-NHS-SS-Biotin不同，Biotin-bisamido-SS-NHS Ester具有膜渗透性，可进入细胞标记胞内蛋白。双硫键在胞内还原环境中可被谷胱甘肽切断，实现生物素标签的可控脱落，适合活细胞内蛋白质动态追踪和功能研究。

七、生物传感器与智能探针构建

结合双生物素的高亲和力信号放大能力和双硫键的可切割特性，构建具有信号放大、可逆释放和重复使用功能的生物传感器。例如在分子诊断中，利用生物素-亲和素体系实现高灵敏度检测，同时利用二硫键实现可逆信号调节或检测平台的重复使用。

八、亲和层析填料功能化

通过NHS酯与层析填料表面的伯氨基反应，在填料表面构建生物素-双硫键修饰层，制备还原响应型亲和色谱填料。该填料可实现目标分子的特异性吸附与还原解吸，具备重复使用特性，有效降低实验成本，且洗脱条件温和，不破坏生物分子活性。

九、交联研究

可用于蛋白质与核酸、蛋白质与蛋白质之间的交联研究，探究生物分子间的相互作用机制。交联后通过还原剂可逆断裂，便于后续分析。

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