Streptavidin-SH|链霉亲和素-巯基
链霉亲和素-巯基(Streptavidin-Thiol)是一种经过化学修饰的链霉亲和素,它在生物研究和诊断中具有广泛的应用。以下是对链霉亲和素-巯基的详细解释:
一、链霉亲和素简介
链霉亲和素(Streptavidin,SA)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,具有与生物素(Biotin)高亲和力的特性。这种高亲和力的结合使得链霉亲和素在生物分子的检测、分离和纯化等领域中得到了广泛应用。
二、巯基修饰
巯基(–SH)是一种非常活跃的官能团,通过化学修饰将巯基引入链霉亲和素分子上,可以使其与其他含有巯基或巯基反应性基团的分子发生特异性共价反应。这种修饰方法通常用于与目标分子的共价结合,从而扩展链霉亲和素的应用范围。
三、链霉亲和素-巯基的制备
链霉亲和素-巯基的制备通常包括以下几个步骤:
材料准备:需要链霉亲和素和巯基修饰试剂,如N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)等。
溶解与混合:在PBS缓冲液中溶解链霉亲和素,并配制适当浓度。同时,将SPDP溶解在适量的DMSO中,制备高浓度的修饰试剂溶液。然后,将SPDP溶液缓慢加入链霉亲和素溶液中,维持反应体系的pH值在7.5左右。
反应与纯化:在室温下反应1-2小时,使SPDP的NHS部分与链霉亲和素上的氨基反应,形成二硫键。接着,向反应混合物中加入还原剂如DL-二硫苏糖醇(DTT)或三(2-羧乙基)膦(TCEP),断开二硫键,释放出巯基。反应完成后,通过透析或凝胶过滤去除未反应的修饰试剂和还原剂,得到纯化的链霉亲和素-巯基。
四、链霉亲和素-巯基的应用
表面修饰:链霉亲和素-巯基可以用于修饰金纳米颗粒、电极、微孔板等表面,通过巯基与金等表面形成稳定的共价键,从而扩展这些材料在生物检测和传感中的应用。
共价连接:链霉亲和素-巯基可以与其他含有马来酰亚胺或其他巯基反应性基团的分子进行共价连接,用于构建复杂的生物传感器和诊断试剂。
生物素检测:链霉亲和素-巯基可以结合生物素标记的分子,如抗体、核酸、蛋白质等,广泛应用于免疫分析、分子生物学实验和细胞成像等领域。
五、链霉亲和素-巯基的优势
链霉亲和素-巯基的优势在于其高特异性、高亲和力以及修饰后不影响链霉亲和素的生物素结合能力。这些特性使得链霉亲和素-巯基在生物化学、免疫学和纳米技术等领域中具有广泛的应用前景。
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