Biotin-C5-Mal，生物素-C5-马来酰亚胺的介绍

Biotin-C5-Mal（生物素-C5-马来酰亚胺）是一种结合生物素与马来酰亚胺基团的化学试剂，其核心特性与应用如下：

一、化学结构与特性

1. 组成

• 生物素（Biotin）：与亲和素/链霉亲和素高亲和力结合（Kd≈10⁻¹⁵ M），用于靶向定位。

• C5连接臂：含5个亚甲基的柔性链，减少空间位阻，避免生物素与马来酰亚胺基团相互干扰，提升标记效率。

• 马来酰亚胺（Maleimide）：与含巯基（-SH）的分子（如半胱氨酸残基）发生特异性迈克尔加成反应，形成稳定共价键。

2. 物理性质

• 外观：白色至类白色粉末。

• 溶解性：溶于大部分有机溶剂（如DMSO、DMF），在含少量助溶剂的水性缓冲液（pH 6.5-7.5）中部分溶解。

• 稳定性：马来酰亚胺基团易水解，需避光、密封储存于-20℃干燥环境，溶解后应立即使用。

二、核心功能与应用

1. 特异性标记含巯基生物分子

• 蛋白质标记：通过与半胱氨酸残基反应，将生物素引入目标蛋白，便于后续分离、纯化及检测（如Western blot、ELISA）。

• 抗体修饰：标记治疗性抗体的游离巯基，减少生物素对抗原结合位点的空间遮挡，保持抗体活性，助力抗体药物偶联物（ADC）研发。

• 酶标记：标记含巯基的酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶），减少对酶活性中心的影响，提升酶联免疫检测灵敏度。

2. 蛋白质相互作用研究

• 标记目标蛋白后，利用C5连接臂的灵活性，使生物素更易与亲和素结合，提高相互作用蛋白的捕获效率，且不影响蛋白间结合作用。

3. 细胞表面标记与成像

• 标记细胞表面标志物（如受体、抗原），实现细胞分选、成像及功能分析（如流式细胞术、荧光显微镜观察）。

4. 药物递送系统

• 通过生物素与亲和素的特异性结合，实现药物的靶向输送和控释。

5. 荧光探针与硫醇分析

• 马来酰亚胺基团具有荧光猝灭能力，可作为荧光探针特异性检测硫醇分析物（如谷胱甘肽）。

三、特点与注意事项

1. 特点

• 高特异性：仅与游离巯基反应，减少非特异性结合。

• 高稳定性：标记产物共价键稳定，实验条件下不易解离。

• 灵活性：C5连接臂降低空间位阻，提升标记效率及后续亲和结合效率。

2. 注意事项

• 储存条件：需严格避光、密封，储存于-20℃干燥环境，避免频繁解冻。

• 反应条件：在pH 6.5-7.5的缓冲液中进行反应，避免含巯基的缓冲液（如Tris）。

• 操作速度：溶解后应立即使用，防止马来酰亚胺基团水解失效。

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