生物素标记大黄酸Biotin-Rhein大黄酸-生物素的理化特性

一、理化信息

• 外观：白色至浅米黄色固体

• 溶解性：DMSO 易溶；PEG 链版本水溶性提升，适配植物蛋白提取液、微生物裂解液、重组蛋白孵育体系

• 储存条件：-20 ℃，密封避光干燥保存

• 表征手段：HPLC、LC-MS、¹H NMR

• 探针类型：可逆非共价亲和探针，缓冲体系可添加 DTT

二、合成制备方法

EDC/NHS活性酯缩合工艺‌：在弱碱性低温无水体系中活化生物素羧基，与大黄酸的游离羟基发生亲核取代反应，全程温和条件避免破坏蒽醌活性骨架。

‌选择性位点偶联‌：预先保护大黄酸的蒽醌环活性位点，定向实现单点标记，保留其与靶蛋白的天然结合能力。

‌柔性连接臂优化‌：可引入短链PEG作为间隔桥，消除空间位阻，大幅提升生物素与链霉亲和素的结合效率。

三、科研应用场景

1. Pull-down + LC-MS/MS 化学蛋白质组学富集吲哚甲酸特异性结合蛋白，筛选胁迫应答、生长素信号调控、微生物互作相关靶点；游离吲哚甲酸竞争对照是必设对照组，用来区分特异性结合与非特异吸附。

2. 小分子 - 蛋白互作验证：SPR、ITC、蛋白芯片，定量验证 ICA 与靶蛋白的结合亲和力、评估结合特异性。

3. 组织荧光示踪：搭配 SA-Cy3 / SA-Cy5 荧光标记，追踪探针在植物根组织、微生物菌落中的分布、亚细胞定位变化。

4. 吲哚构效研究：对比吲哚甲酸与吲哚乙酸（IAA）探针富集差异，解析侧链结构对吲哚类分子受体识别的影响。

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生物素标记冬凌草乙素

SA-PEG-Biotin硬脂酸聚乙二醇生物素

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Biotin-磺酸-琥珀酰亚胺酯

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Biotin-美迪紫檀素

Biotin-牛磺酸