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阿米舒必利-过氧化物酶标记物的免疫活性检测方法的原理是什么?

2024-10-09 [136]

阿米舒 必 利-过氧化物酶标记物|Amisulpride-Peroxidase Conjugate(Amisulpride-HRP)

阿米舒必利 - 过氧化物酶标记物的免疫活性检测方法主要有酶联免疫吸附测定(ELISA)等,其原理如下:

一、基本原理

抗原抗体特异性结合

阿米舒必利 - 过氧化物酶标记物作为一种抗原,能够与样本中特异性的抗体发生结合。这种结合是高度特异性的,即只有针对阿米舒必利的抗体才能与之结合。

例如,在检测血清样本中是否存在阿米舒必利抗体时,若样本中含有该抗体,就会与标记物上的阿米舒必利发生特异性结合。

酶促反应产生可检测信号

过氧化物酶能够催化特定的底物发生化学反应,产生可检测的信号。常见的底物如四甲基联苯胺(TMB),在过氧化物酶的作用下会发生颜色变化。

当阿米舒必利 - 过氧化物酶标记物与抗体结合后,通过加入底物,过氧化物酶催化底物发生反应,产生颜色变化、发光等信号。

二、ELISA 具体原理

包被

将阿米舒必利 - 过氧化物酶标记物或未标记的阿米舒必利(作为捕获抗原)包被在固相载体(如酶标板)表面。这个过程通常是通过物理吸附或化学结合的方式,使抗原牢固地固定在载体上。

封闭

加入封闭液,封闭载体表面未结合抗原的位点,以减少非特异性结合。通常使用牛血清白蛋白、脱脂奶粉等蛋白质溶液进行封闭。

加样

加入待检测的样本(如血清、血浆等),如果样本中含有针对阿米舒必利的抗体,这些抗体就会与包被在载体上的抗原结合。

洗涤

用洗涤液洗去未结合的物质,包括未结合的抗体和其他杂质,以降低背景信号,提高检测的特异性。

加酶标二抗

加入与一抗(样本中的抗体)特异性结合的酶标二抗。二抗通常是用酶(如过氧化物酶)标记的,能够与一抗结合,并且携带酶分子。

洗涤

再次洗涤,去除未结合的酶标二抗。

加底物

加入过氧化物酶的底物,如 TMB。在过氧化物酶的催化下,底物发生颜色变化或产生发光等信号。

检测信号

使用酶标仪等设备检测反应产生的信号强度。信号强度与样本中阿米舒必利抗体的含量成正比,通过与标准曲线比较,可以确定样本中抗体的浓度。

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