氨苄青霉素-过氧化物酶标记物的制备方法有哪些


氨苄青霉素-过氧化物酶标记物的制备方法主要有以下几种:
化学交联法
原理:利用化学交联剂将氨苄青霉素与过氧化物酶进行共价连接。常用的交联剂有戊二醛等,它能与氨苄青霉素和过氧化物酶分子上的氨基等活性基团反应,形成稳定的共价键。
步骤:首先将氨苄青霉素和过氧化物酶分别溶解在适宜的缓冲液中,然后在一定的反应条件下(如适宜的pH值、温度和反应时间等)加入交联剂进行反应,反应结束后通过透析、离心等方法进行纯化,得到氨苄青霉素-过氧化物酶标记物。
基因工程法
原理:通过基因工程技术将氨苄青霉素抗性基因与过氧化物酶基因进行融合表达,从而得到氨苄青霉素-过氧化物酶标记物。
步骤:首先构建含有氨苄青霉素抗性基因与过氧化物酶基因融合的重组质粒,然后将重组质粒转化到合适的宿主细胞中进行表达,最后通过细胞破碎、离心、层析等方法对表达产物进行分离纯化,得到氨苄青霉素-过氧化物酶标记物。
其他方法
利用氨苄青霉素抗性质粒载体:氨苄青霉素抗性质粒载体,其质粒骨架上含有抗氨苄青霉素基因,该基因为β-内酰胺酶的编码基因与β-半乳糖苷酶α肽编码基因的融合基因。通过对现有质粒载体质粒骨架上氨苄青霉素抗性基因的改造,来解决β-内酰胺酶泄漏的问题,进而可用于制备氨苄青霉素-过氧化物酶标记物。
在特定条件下利用菌体或细胞制备:例如使用醛缩酶产生菌或通过重组DNA转化的细胞,在培养的同时,将底物直接加入培养液中,或使用从培养液中分离出来的菌体、洗净的菌体等进行制备。
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