FITC-LPS的制备方法有哪些
2026-01-21
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FITC-LPS(异硫氰酸荧光素标记脂多糖)的制备方法主要基于脂多糖(LPS)与FITC的共价结合反应,以下是一种详细且通用的制备流程:
一、LPS预处理
解离聚集状态:将LPS溶解于0.5%脱氧胆酸钠溶液中,在0℃下搅拌20分钟。这一步骤的目的是解离LPS的聚集状态,使其形成单链结构,有利于后续与FITC的反应。
调节pH值:使用1mol/L HCl将溶液的pH值调节至5.0。这一步骤的目的是促进LPS氨基的质子化,为后续与FITC的反应提供适宜的化学环境。
二、FITC标记反应
准备FITC溶液:将FITC溶解于0.1mol/L磷酸钠缓冲液(pH9.5)中,制备成FITC溶液。
混合反应:将上述FITC溶液加入到经过预处理的LPS溶液中,在37℃下避光孵育3小时。这一步骤中,FITC的异硫氰酸酯基团与LPS分子上的氨基发生亲核加成反应,形成稳定的硫脲键,从而实现LPS的荧光标记。
三、纯化与后处理
离心分离:反应结束后,将混合物在4℃下与磷酸钠溶液分离,通过离心去除未反应的FITC。
透析去除杂质:将离心后的上清液进行透析处理,以去除小分子杂质,如未反应的FITC、磷酸钠等。
获得高纯度FITC-LPS:经过透析处理后,即可获得高纯度的FITC-LPS溶液。该溶液可在2-8℃下避光保存数月,以稳定使用。
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