Biotin-SS-NH2,生物素-二硫键-氨基
生物素-二硫键-氨基是一种异双功能可裂解交联试剂,由三部分组成:生物素端、二硫键(-S-S-)连接臂和氨基端(-NH₂)。它兼具生物素的高亲和力识别能力、二硫键的还原响应可断裂特性以及氨基端的广泛偶联活性,是蛋白质标记、亲和纯化和可控释放研究中较常用的双功能接头试剂之一。
外观为白色至淡黄色粉末,纯度≥95%,需在-20℃以下避光、干燥保存,保质期约1年。溶于DMSO、DMF、乙醇等有机溶剂,水溶液中需现配现用。
基本组成
生物素端可与链霉亲和素(Streptavidin)或亲和素(Avidin)以较高亲和力(Kd≈10⁻¹⁵ M)特异性结合,实现分子捕获与信号放大。二硫键连接臂是核心设计亮点,在还原性环境中(如细胞内高浓度谷胱甘肽GSH或外加还原剂DTT、TCEP)可被特异性断裂,实现生物素标签的可控脱落与释放。氨基端(-NH₂)可与羧基(-COOH)、NHS酯、异硫氰酸酯、醛基等活性基团发生偶联反应,适用于标记蛋白质、抗体、多肽、纳米材料等多种生物分子。
光学与化学特性
无荧光特性,本身不发光,需配合荧光标记的链霉亲和素或后续荧光检测体系使用。二硫键在氧化环境中稳定,在还原环境中快速断裂,断裂条件温和(如10 mM DTT,37℃,30分钟即可全断裂),具有良好的生物正交性和可控性。
核心功能
生物素端提供较强亲和捕获能力,可实现目标分子的高效富集与检测。二硫键提供可控释放功能,标记后可在需要时通过还原处理将生物素标签脱落,释放出原始目标分子,特别适合需要后续回收或释放活性分子的实验场景。氨基端提供广泛的偶联活性,可灵活连接各类含羧基或活性酯的生物分子。
主要应用
一是可裂解亲和纯化,标记目标蛋白后通过链霉亲和素柱纯化,再用还原剂断裂二硫键洗脱,获得高纯度且无标签残留的目标蛋白。
二是可控释放研究,在药物递送或纳米载体领域,利用还原响应二硫键实现 cargo 的可控释放。
三是蛋白质组学与互作研究,标记后捕获蛋白复合物,还原后释放进行质谱分析。四是细胞表面标记与释放,标记细胞表面蛋白后通过还原处理实现可控脱落,研究蛋白功能。
使用建议
常用溶剂为DMSO、DMF,现配现用。氨基端偶联反应一般在pH 7.5–8.5的PBS或碳酸盐缓冲液中进行,反应时间30分钟至2小时。二硫键断裂常用10–50 mM DTT或5–10 mM TCEP,37℃处理15–60分钟。全程需避光操作,避免反复冻融,建议分装保存。
注意事项
仅供科研使用,不可用于人体实验或临床治疗。操作时避免与皮肤和眼睛直接接触,遵守实验室安全操作规程。二硫键对氧化敏感,需在惰性气体保护下保存和使用。
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